液体培养基是培养基物理分类一种,是相对固体培养基而言的,是微生物或动植物细胞的液状培养基 。在液体培养基中的培养称为液中培养、液体培养或液内培养 。
培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同 。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存 。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在3~6℃的冰箱内 。
配制培养基的原则
根据培养目的需要选择适宜的营养物质
由于微生物营养类型复杂 , 不同微生物有不同的营养要求 。因此,要根据不同微生物的营养需求选择适宜的营养物质,配制针对性强的培养基 。
自养微生物有较强的合成能力,能以简单的无机物如co2和无机盐合成复杂的细胞物质 。因此,培养自养微生物的培养基应由简单的无机物组成 。
异养微生物的合成能力较弱,不能以CO2作为唯一碳源或主要碳源,故应在培养基中至少添加一种有机物 。
1配料
配方换算→在容器中加入少量水〔蒸馏水,自然水〕→按照配方称取各种药品〔依次加入〕→加足所需水量《一药一勺,取药后立即盖上瓶盖》 。
2溶解
淀粉溶解:少量冷水调成糊状
加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95~97℃ ,且需要边
加热边搅拌以防止烧焦 。
3调PH
用1N的盐酸或的1N NaOH把培养基调节到所要求的值 。
4过滤
滤纸或棉花进行过滤 。
5分装
一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用 。
(1)三角瓶
若作静置培养,则100 ml培养基/250 ml的三角瓶,最多不能超过150 ml培养基/250 ml的
三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15~20 ml培养基/250
ml的三角瓶 , 保证通气良好 。
(2)试管分装
液体培养基一般装4~5 ml,约试管的1/4高度;
固体斜面培养基一般装3~4 ml,约试管的1/5高度 。
6包扎
分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿 。
7灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌 。如果灭菌的温度太高 , 营养成分会被破坏 , 培养
基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深 。
8摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2 。
9贮存
培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用 。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用
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