生物类实习报告怎么写？( 四 )

我们的基础工作由装移液枪枪头开始，到试管、三角瓶、西林瓶、离心管等各种用品高温灭菌前的包装，高温灭菌机的使用。学习离心机、PCR仪、分光光度计等各种仪器的使用和操作。学习配各种LB培养液，有液体的，固体的。固体培养基在灭菌后还要进融化倒平板。打开实习记录的笔记本，每一页都记录着工作内容以及试剂的存放地方（如4℃冰箱），以便查找。这是我这一个多月以来的工作收获，每天在实验室都有事情做，虽然不是很辛苦，但细心、耐心是从事实验室工作的最基本的能力要求。第一周，先熟悉下实验室的环境，有摇床、分光光度计、离心机等仪器；了解下实验设备的大致用法，如无菌操作台操作前需要打开紫外灯照射20分钟；做些最基本的操作：如装移液枪的枪头、搞好实验室的卫生; 看着工作人员做着实验，我不懂就问，虚心请教；到了第二周就有机会真正跟着工作人员学习怎样操作，老师做着实验，我在一旁看着，听着他说哪些要注意的事项等等，认真做好笔记，属于模仿、学习的阶段；往后的时间就是自己操作，然后不懂的地方就请教老师，与工作人员互相讨论，找出解决问题的办法。
等熟识了基础工作后，我们五人开始分别各跟随一位前辈去负责项目里的不同工作。我跟随着李志强师兄作构建沙门氏菌质粒致死平衡系统的研究。
研究的具体内容是基于大肠杆菌（E.coli）染色体上asd基因的已知序列，利用λ噬菌体的Red同源重组系统一步法构建E.coli DH5α的asd基因缺失突变株E.coli DH5αΔasd::cat ，在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒Pcp20介导二次同源重组，以去除上述缺失突变株中氯霉素抗性筛选基因。结合PCR扩增和测序结果，证明DH5αΔasd缺失突变株的正确构建。该缺失突变株失去了在普通LB培养基上生长的能
力，只有添加DAP或导入表达asd基因的质粒（asd基因互衬试验）才能在LB培养基上生长，与原型DH5α比较，其生长速度和生长对数期、接受不同拷贝数质粒的转化效率几乎相一致，基于该缺失突变株构建出以asd营养基因为标志的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统。
在整个实验步骤中，要进行三次DNA片断或质粒转化，可以用CaCl2法或电转法，而进行转基因，就要制备感受态细胞。感受态细胞的制备过程非常繁复，而且耗时多，温度同时间要掌握得适当，制备出的感受态细胞的转化率就会非常低下，我在初期经常会在这过程中出错，导致浪费了不少资源和时间，令实验进展缓慢，但经过多次的实践，终于制备出效转化效率高的感受态细胞。而在化学转化或电转化过程中，受体菌的处理温度同样需要控制得好，并且操作动作要快，才能提高转化效率。