多肽修饰|磷酸化合成多肽的修饰技术

多肽修饰(磷酸化合成多肽的修饰技术)固相方式合成磷酸化肽分两种方式:
(1)预制磷酰化构件,然后组装到肽链一载体上(Building block法);
(2)肽链一载体磷酰化(global phosphorylation) 。

【多肽修饰|磷酸化合成多肽的修饰技术】

最初制备磷酰化的Tyr、Thr及Ser时,多用磷酸的双甲酯、苄酯及叔丁酯形百思特网式参与对这3种AA的酰化 。
多肽修饰|磷酸化合成多肽的修饰技术

磷酸化合成多肽的修饰-专肽生物
为了避免液相法预制操作的麻烦,可用上述的类似条件直接酰化含有Ser 、 Thr或Tyr的肽树脂:
多肽修饰|磷酸化合成多肽的修饰技术

磷酸化合成多肽的修饰-专肽生物
也可以使用不带烷基酯的Fmoc一Tyr[PO3H2]一OH作为构件,缩合到肽树脂上 。这种方式对短链的磷肽制备是可行的 。对长肽而言,缩合收率会受到影 。尤其是当两个磷酞化的残基在肽链上相邻时,会发生脱水而产生焦磷酰型副产物的麻烦 。此外,当被磷酰化的残基是Ser时,因-Ser [PO3H2]一的位阻较小,在脱除--氨基上的Fmoc时在Ser上发百思特网生消除,生成脱氢丙氨酸残基(Dha),同时脱掉磷酰基 。为了避免上百思特网述麻烦 。许多实验室建议使用单苄酯的构件Fmoc一AA一[PO( OBzl) OH]一OH最为理想 。较近的研究发现,单苄酯磷酸化
构件对固相氨基组分的最佳缩合条件为:
Fmoc一AA一[PO( OBzl) OH]一OH/HBTU(或TBTU)/HOBT/DIEA(1:1:1:2)磷酰结构中的单苄酯与Wang树脂的裂解条件一样,即95%TFA/H2O/1~2h 。
一些研究表明,肽链在载体上组装完成后再进行的固相磷酰化方式似乎更为实用,因为它可以综合Boc及Fmoc两种方式于同一合成中,而且产物中可以存在磷酰化的残基及游离侧链的Ser、 Thr两种形式(图1),为结构一活性关系研究提供了丰富的样品资源 。
多肽修饰|磷酸化合成多肽的修饰技术

磷酸化合成多肽的修饰-专肽生物
(图1)先组装肽链后磷酰化的固相磷肽合成
(图1) 的合成中先后组装了Tyr8、Thr6、Ser4这3个带羟基侧链的残基 。根据设计要求 。Ser6是被磷酰化的位点,Thr4及Tyr8保护侧链游离基 。因此从一开始就对Ser4不加任何侧链保护,得以与另两个残基区别对待 。