什么是酶切 _限制性_问人人知识网

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限制酶（英语：Restriction enzyme）又称限制内切酶或限制性内切酶（restriction endonuclease），全称限制性核酸内切酶[1]，是一种能将双股DNA切开的酵素。切割方法是将糖类分子与磷酸之间的键结切断，进而于两条DNA链上各产生一个切口，且不破坏核苷酸与碱基。切割形式有两种，分别是可产生具有突出单股DNA的黏状末端，以及末端平整无凸起的平滑末端。[2] 。由于断开的DNA片段可由另一种称为DNA连接酶的酵素黏合，因此染色体或DNA上不同的限制片段，得以经由剪接作用而结合在一起。
限制性内切酶酶切注意事项
在进行限制性酶切反应过程中，影响限制性酶切反应效果的因素较多，要设计酶切反应，一般均应考虑诸如酶切系统、温度条件、反应体积、底物性质及星型反应等因素。根据各种不同的条件，酶切反应的设计一般应注意以下问题：
①先用在低离子强度的缓冲液中活性高的酶切割DNA ，然后加入适量NaCl及第二种酶，继续反应；
②使用能够使多数内切酶均表现较高活性的单种缓冲液。
10酶切底物DNA应具备一定的纯度，其溶液中不能含有迹量酚、氯仿、乙醚，大于10mM的EDTA，去污剂SDS以及过量的盐离子浓度，否则会不同程度地影响限制酶的活性。
11DNA碱基上的甲基化修饰也是影响酶切的一个重要因素，所以转化实验所选择的受体菌株应考虑到使用的菌株中的酶修饰系统。
12要保证酶作用时的最佳反应条件(ph, 温度)和底物用量，酶反应才能有效地进行。
13反应取酶时应使用无菌吸头，以免污染酶液，同时应尽量缩短酶在温室的放置时间。
14高于37℃或需长时间保温时，可加入矿物油覆盖在反应液上以减少水分蒸发。
15反应混合物混匀时，应避免强烈振荡以保证不使内切酶变性及DNA大分子的完整。
16反应前的低速离心是必要的，这可使因混匀吸附于管壁上的液滴全部沉至管底。
17用已硅化的离心管进行酶切反应，可获得更佳的酶切效果，否则DNA可能粘附于管壁而影响酶切效果。
18终止酶反应可根据需要采用不同的方法：
①酶切后不需进行下一步反应，可加入含EDTA的终止液终止反应；
②若需进一步反应(如连接，切割等) ，可将反应管置65℃保温20-30分钟，以灭活酶终止反应。
③可用酚/氯仿抽提，乙醇沉淀获得较纯DNA进行下一步酶学操作。
二、限制性酶解中常见的问题及解决措施：
限制性酶切割DNA底物的操作过程中，会出现一些问题，产生的原因主要为酶解体系中各要素处于非最佳状态，包括DNA的纯度和特性，反应缓冲液、反应体积、反应时间及温度等。