质粒dna的少量制备


质粒dna的少量制备

文章插图
基本方案1:碱裂解法制备粗制裂解物
01 实验材料
  • 含有氨苄青霉素或其他适当的选择性试剂的LB培养基或丰富培养基(如超级肉汤或TB超级肉汤培养基)
  • 带有质粒的大肠杆菌菌株
  • 葡萄糖/Tris/EDTA (GTE)溶液卵清溶菌酶
  • NaOH/SDS 溶液
  • 3 mol/L乙酸钾溶液 , pH 约5.5
  • 异丙醇
  • 70%乙醇
  • 约20 ml容量的高速离心管
02 实验步骤
1)往5 ml的含选择性试剂(通常是氨苄青霉素)的LB培养基或丰富培养基接种单菌落,于37℃剧烈振荡培养过夜 。
2)往2L烧瓶中加入 500 ml含有适当抗生素的LB培养基,然后加人1 ml过夜培养的大肠杆菌培养物,再于37℃培养至饱和状态(OD600≈4),于4℃,6000