高效液相色谱分析|高效液相色谱基本原理( 三 )


高效液相色谱分析|高效液相色谱基本原理
图8.六通进样阀构造原理示意图
5.分离系统分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱 。
色谱柱:色谱是一种分离分析手段 , 分离是核心 , 因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏 。色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成 。色谱填料为经过制备处理后 , 用于填充色谱柱的物质颗粒 , 通常是5-10粒径的球形颗粒 。色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类 , 尺寸规格也不同:

【高效液相色谱分析|高效液相色谱基本原理】

①常规分析柱(常量柱) , 内径2~5mm(常用4.6mm , 国内有4mm 和5mm) , 柱长10~30cm;
②窄径柱(narrow bore , 又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn) , 内径1~2mm , 柱长10~20cm;
③毛细管柱(又称微柱microcolumn) , 内径0.2~0.5mm;
④半制备柱 , 内径>5mm;
⑤实验室制备柱 , 内径20~40mm , 柱长10~30cm;
⑥生产制备柱:内径可达几十厘米 。
高效液相色谱分析|高效液相色谱基本原理
图9.色谱柱结构示意图
保护柱:保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染 , 从而延长色谱柱的寿命 。针对不同型号的色谱柱 , 应选择相对应填料的保护柱 。应注意柱芯也是有寿命的 , 应该定期进行更换 。
柱温箱:维持色谱柱温度的恒定 , 以免造成保留时间的变化 , 保证分离效果的稳定性 。
6.检测器检测器是用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置 , 是HPLC 仪的三大关键部件之一 。HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低(即对温度、流量等外界变化不敏感)、线性范围宽、重复性好和适用范围广 。
高效液相色谱分析|高效液相色谱基本原理
表2.HPLC常用检测器的基本特性
7.数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作 , 使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展 。